Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型号糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现口内自身突变到经常出现1标准型白血病临床病因的成效率在儿童时期就有很好的叙述，多个口内自身突变中性的儿童之则有70%在肝脏叠加后10月内患上白血病，而随访15年的儿童这一%-上升到84%。比较之下，占多数临床1标准型白血病一半以上的标准型1标准型白血病的患病机制还从未获得充分的研究课题。

更加多的人开始使用分期的系统来定义1标准型白血病的成效：个基底在经常出现多种口内自身突变时转入第1过渡期，经常出现血糖异常时转入第2过渡期，经常出现病因时转入第3过渡期。一些多发口内自身突变中性的个基底，在1期和2期，成效较慢，并其发展为患病的1标准型白血病。我们之前叙述了除此以外成员在首次检查到多种口内自身突变结果推断后至极多10年无白血病的快得多成效者，这组成员病征人数极多，但特征颇为恰当。随后，我们发现口内自身抗原特异性CD8+T肝细胞反不宜在成效很慢的病征之中前提不不存在，但在同类型患病和肇因的白血病病征之中很容易检查到。这有可能断定，与成效病征比较，这些病征性疾病反不宜的适度增强。

早期研究课题断定，尽管适度性T肝细胞(Treg)数量正常人，但白血病病征不存在一些功能性缺陷，其之中最主要对IL-2的反不宜潜能减小。此外，白血病病征之中的波动CD4+T肝细胞有可能对适度极富抵抗性，显出为波动T肝细胞的抑制作用减慢，纯净消除的Treg和基底外消除的游离Treg，以及抗原经历的CD4+T肝细胞之中IL-2反不宜减慢。本研究课题的目的是叙述了CD4+适度性T肝细胞(Treg)在一小群极很慢成效者之中的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以成年人结合的纵向研究课题，在21岁此表确诊的病征家庭成员之中检查1标准型白血病的危险考量。我们之前叙述了长期很慢成效者的特征，他们保持多重口内自身突变中性最多10年，但从未经常出现白血病的临床病因，慢性或非顺利受虐性疾病。随后，10名继续保持无白血病并主动提供大量血液结果推断的很慢成效者扩展到T和B肝细胞功能性统计分析。在目前的研究课题之中，8名慢成效者(SP组成员)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身突变中性。所有的旁观者都处于1标准型白血病成效的1期，尽管一些人随后丧失了口内自身突变对某些抗原的中性反不宜，然而，一名病征仍然处于2期至极多6年，但从未经常出现临床病因，一名病征被诊断为白血病，该受试者72岁，在通过观察实验结果推断时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析之中对该丝氨酸顺利进行了单独评量。分离外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞法术和T肝细胞抑制作用试验评量丝氨酸之中Treg的频率、表标准型和功能性。使用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和重回)顺利进行无监督聚类统计分析，评量Treg表标准型。

结果：与健康丝氨酸比较，来自慢成效基底的知觉CD4+T肝细胞的监督聚类推断，作用于的知觉CD4+ Treg频率上升，与低剂量游离的TNFR的系统性酶(GITR)透露上升有关。一名HbA1c上升时的病征与成效很慢者和转换的相比较组成员比较，Treg曲谱有所有所不同。功能性得出论断，与健康丝氨酸比较，来自很慢成效基底的Treg内源性的CD4+波动T肝细胞抑制作用微小损坏。显出为对波动CD4+T肝细胞CD25和CD134透露的抑制作用上升。

所示1 深入的表标准型统计分析推断，CD4+Treg亚标准型在慢成效队列之中上升。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的已逝CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标示出物透露深入研究出10个元簇:知觉T肝细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T肝细胞;HLA-DR + GITR +知觉T肝细胞;文件的系统Treg_1;文件的系统Treg_2;文件的系统Treg_3;和文件的系统Treg_4。(a)使用9个有所不同Treg标示出作用于的10个元簇的MST。每个节点都是一个战斗群(100个战斗群)，相当大的元战斗群(10个元战斗群)在节点组成员四周上色。每个节点之中的饼所示透露单个标示出的透露级别。(b)每个元聚类的热所示，以推断整基底标示出透露。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)作用于所示，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖物。(e-l)比较稀土元素为每个metacluster装有本站所示(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:文件的系统Treg_2 (e),文件的系统Treg_3 (f),文件的系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T肝细胞(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T肝细胞(l)。紫色白点都是ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩核查。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 使用CITRUS的实测证实，Treg频率的上升是成效很慢的标志。分级内源性(a - f)和柑橘统计分析(g-k)来得SP旁观者和转换的HD旁观者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的近现代所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR透露顺利进行分离，建模FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组成员以及丝氨酸SP 606(紫色)之中CD25+ cd127的频率汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+内源性子集的装有本站所示;(c) HLA-DRloGITR−(文件的系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件的系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件的系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件的系统T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3透露强度渐变，交叉突出的簇被辨别为SP和HD队列之间的有所不同。(j)装有本站所示推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员之中，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的比较稀土元素(%-)。(k)直方所示推断每个簇的表标准型(暗红色)和Treg标示出比较透露与或多或少透露(深蓝色);上列，文件的系统Treg_3;下面一行，文件的系统Treg_4。或多或少与所有其他簇之中标示出的透露有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩核查

所示3 与健康献血者比较，成效很慢者知觉treg的GITR上升。每个知觉CD4+T肝细胞元簇(知觉T肝细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T肝细胞;HLA-DR + GITR +知觉T肝细胞;文件的系统Treg_2;文件的系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个透露标示出的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的透露热所示(sp606不最主要在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇之中所有HD(黑色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR透露串连，推断直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon类推符号秩和核查，p< 0.07(紫色)所有丝氨酸最主要，p< 0.05(深蓝色)丝氨酸SP 606和转换的HD不最主要在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR透露，从分级内源性，从所有HD(黑色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)串连，推断直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推符号秩核查

所示4 来自很慢成效的CD4+ treg肝细胞管控波动CD4+T肝细胞的潜能减小。SP组成员用深蓝色的本站和白点透露，HD组成员用黑色的本站和白点透露，紫色的本站/白点透露丝氨酸sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被标示出为CFSE, Treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化肝细胞，培育3天后顺利进行流式肝细胞法术检查。(a-d)与CD4+接收者者比较不宜的treg培育(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培育。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE抑制作用%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用%-。使用中性相比较(作用于的响不宜肝细胞不含treg)计数抑制作用%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

所示5 波动CD4+T肝细胞对很慢成效的T肝细胞已逝化的抑制作用更敏感性。SP组成员用深蓝色的本站和白点透露，HD组成员用黑色的本站和白点透露，紫色的本站/白点透露丝氨酸sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标示出，treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化肝细胞，培育3天后顺利进行流式肝细胞法术(CD25反染)和肝介导统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培育。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE抑制作用百分率(b)。(c,d) CD25抑制作用百分率(c)和CD134抑制作用百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育之中的透露。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

论断：我们得出的论断是，来自很慢成效子的已逝化知觉CD4+Treg在GITR透露之中获得了扩展和丰富，强调了大幅度研究课题Treg在1标准型白血病危险性个基底之中的互补的必要性。

译文说是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28