Diabetologia：介导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次成现口内自身免疫到再次成现1标准型肾病诊疗疼痛的的发展率在青少年一时期就有很好的所述，多个口内自身免疫乙标准型肝炎的青少年中的有70%在人质内转换后10年末患上肾病，而随访15年的青少年这一%缩减到84%。远比之下，占诊疗1标准型肾病一半以上的标准型1标准型肾病的发病机制还没想得到充分的分析。

日渐多的人开始可不用于已确定系统来定义1标准型肾病的的发展：生殖在再次成现多种口内自身免疫时重回第1先决条件，再次成现血糖诱发时重回第2先决条件，再次成现疼痛时重回第3先决条件。一些多发口内自身免疫乙标准型肝炎的生殖，在1期和2期，的发展较慢，并发展为发病的1标准型肾病。我们此前所述了一两组在首次验证到多种口内自身免疫样本后至多于10年无肾病的近于慢的发展者，这两组病患人数多于，但不同之处非常明确。随后，我们发现口内自身特异性特异性CD8+T细胞内反可不在的发展平稳的病患中的基本不存在，但在近期发病和普遍存在的肾病病患中的很难以验证到。这有可能表明，与的发展病患远比，这些病患自身免疫反可不的调节增强。

早期分析表明，尽管调节性T细胞内(Treg)生产量正常，但肾病病患存在一些功能缺陷，其中的以外对IL-2的反可不能力减缓。此外，肾病病患中的的效可不CD4+T细胞内有可能对调节更具抵抗性，表现为效可不T细胞内的抑制作用减弱，连续性产生的Treg和质外产生的作用于Treg，以及特异性经历的CD4+T细胞内中的IL-2反可不减弱。本分析的意在是所述了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一个大近于平稳的发展者中的的不同之处，他们的总数组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以成年人为基础的斜向分析，在21岁以下确诊的病患亲属中的检查1标准型肾病的危险因素。我们此前所述了长年平稳的发展者的不同之处，他们保持多重口内自身免疫乙标准型肝炎高达10年，但没再次成现肾病的诊疗疼痛，慢性或非同步受虐自身免疫。随后，10名此后保持无肾病并主动提供大量人质内样本的平稳的发展者不属于T和B细胞内功能分析。在目前的分析中的，8名慢的发展者(SP两组)，中的位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的口内自身免疫乙标准型肝炎。所有的参与者都受制于1标准型肾病的发展的1期，尽管一些人随后失去了口内自身免疫对某些特异性的乙标准型肝炎反可不，然而，一名病患已经受制于2期至多于6年，但没再次成现诊疗疼痛，一名病患被诊断为肾病，该人会72岁，在采自实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在的测试中的对该小分子同步进行了直接审核。除去外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多变量流式细胞内术和T细胞内抑制作用次测试审核小分子中的Treg的高频率、表标准型和功能。可不用于FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和回归)同步进行无监督聚类分析，审核Treg表标准型。

结果：与健康小分子远比，来自慢的发展质的思绪CD4+T细胞内的监督聚类推断，激活着的思绪CD4+ Treg高频率缩减，与阿托品作用于的TNFR相关蛋白(GITR)表达成来缩减有关。一名HbA1c升高的病患与的发展平稳者和转换的对照两组远比，Treg谱有所不同。功能分析表明，与健康小分子远比，来自平稳的发展质的Treg介导的CD4+效可不T细胞内抑制作用显著受损。表现为对效可不CD4+T细胞内CD25和CD134表达成来的抑制作用缩减。

三幅1 深入的表标准型分析推断，CD4+Treg亚标准型在慢的发展描述符中的缩减。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有小分子的活着CD4+CD45RA -细胞内上。根据上面物表达成来确认成10个元簇:思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)可不用于9个不同Treg上面生成的10个元簇的MST。每个键值推选一个空降兵(100个空降兵)，较大的元空降兵(10个元空降兵)在键值两组周围上色。每个键值中的的饼三幅回可不单个上面的表达成来行政级别。(b)每个元聚类的热三幅，以推断整质上面表达成来。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成三幅，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比较总质量为每个metacluster箱示意三幅(总质量> 0.05%)确定为HD和SP两组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞内(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞内(l)。深蓝色橘色推选捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 可不用于CITRUS的预测模标准型证实，Treg高频率的缩减是的发展平稳的标志。分级介导(a - f)和橄榄分析(g-k)来得SP参与者和转换的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的推选性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达成来同步进行除去，模拟器FlowSOM群质。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及小分子SP 606(深蓝色)中的CD25+ cd127的高频率简介三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导子集的箱示意三幅;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达成来强度着色，箭头突成的簇被定位为SP和HD描述符密切关系的不同。(j)箱示意三幅推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组中的，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相比较总质量(%)。(k)直方三幅推断每个簇的表标准型(粉红色)和Treg上面相比较表达成来与背景表达成来(红色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇中的上面的表达成来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与健康献血者远比，的发展平稳者思绪treg的GITR缩减。每个思绪CD4+T细胞内元簇(思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表达成来上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的表达成来热三幅(sp606不以外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表达成来串联，推断直方三幅(c)和简介三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有小分子以外，p< 0.05(红色)小分子SP 606和转换的HD不以外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR表达成来，从分级介导，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)串联，推断直方三幅(e)和简介三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自平稳的发展的CD4+ treg细胞内遏制效可不CD4+T细胞内的能力减缓。SP两组用红色的两条路线和橘色回可不，HD两组用黑色的两条路线和橘色回可不，深蓝色的两条路线/橘色回可不小分子sp606。可不用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上面为CFSE, Treg按判读的%溶液。用抗CD3 /28微珠重置细胞内，培育3天后同步进行流式细胞内术验证。(a-d)与CD4+这样的话者相比较可不的treg培育(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用一般而言。可不用于乙标准型肝炎对照(激活着的响可不细胞内含treg)计算抑制作用一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

三幅5 效可不CD4+T细胞内对平稳的发展的T细胞内重置的抑制作用更敏感。SP两组用红色的两条路线和橘色回可不，HD两组用黑色的两条路线和橘色回可不，深蓝色的两条路线/橘色回可不小分子sp606。可不用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上面，treg按判读的%溶液。用抗CD3 /28微珠重置细胞内，培育3天后同步进行流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用次之(b)。(c,d) CD25抑制作用次之(c)和CD134抑制作用次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中的的表达成来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

结论：我们得成的结论是，来自平稳的发展子的重置思绪CD4+Treg在GITR表达成来中的想得到了扩展和丰富，强调了进一步分析Treg在1标准型肾病效用生殖中的的异质性的必要性。

原文来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28