Diabetologia：触发但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到家兔自身抗本体到用到1同型肾病流行病学腹泻的成果率在成人时期就有很好的所述，多个家兔自身抗本体HIV的成人中所有70%在肝细胞转换后10年内患上肾病，而随访15年的成人这一倍数增高到84%。相较之下，占流行病学1同型肾病一半以上的同型1同型肾病的确诊机制还未获取充分的熟悉研究。

愈发多的人开始用到分期种系统来定义1同型肾病的成果：个本体在用到多种家兔自身抗本体时进入第1期中，用到摄入量异常时进入第2期中，用到腹泻时进入第3期中。一些多发家兔自身抗本体HIV的个本体，在1期和2期，成果较迟，并发展为确诊的1同型肾病。我们在此之后所述了一组成员在首次测定到多种家兔自身抗本体样品后至少10年无肾病的想像中迟成果者，这组成员病征人数少，但特质非常一致。随后，我们推测家兔自身蛋白质特异性CD8+T线或粒本体自由基在成果较迟的病征中所基本不存在，但在近期确诊和起因于的肾病病征中所很容易测定到。这有可能得造出论点，与成果病征相较，这些病征自身免疫自由基的调节增强。

早期熟悉研究得造出论点，尽管调节性T线或粒本体(Treg)数量长时间，但肾病病征存在一些新功能缺陷，其中所仅限于对IL-2的自由基并能降低。此外，肾病病征中所的物理现象CD4+T线或粒本体有可能对调节更具抵抗性，展现造出为物理现象T线或粒本体的依赖性消散，自然产生的Treg和本活体产生的可借Treg，以及蛋白质亲身经历的CD4+T线或粒本体中所IL-2自由基消散。本熟悉研究的意在是所述了CD4+调节性T线或粒本体(Treg)在领头想像中较迟成果者中所的特质，他们的年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

分析方法：BOX熟悉研究是一项以人群系统化的纵向熟悉研究，在21岁以下确诊的病征亲属中所核对1同型肾病的危险因素。我们在此之后所述了长期较迟成果者的特质，他们保持一致多重家兔自身抗本体HIV超过10年，但未用到肾病的流行病学腹泻，迟性或非开展性自身免疫。随后，10名暂时保持一致无肾病并愿意提供大量血液样品的较迟成果者纳入T和B线或粒本体新功能分析。在目前的熟悉研究中所，8名迟成果者(SP组成员)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身抗本体HIV。所有的参加者都所处1同型肾病成果的1期，尽管一些人随后无法控制了家兔自身抗本体对某些蛋白质的HIV自由基，然而，一名病征仍然所处2期至少6年，但未用到流行病学腹泻，一名病征被诊断为肾病，该受试者72岁，在野外实验样品时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中所对该NADPH开展了除此以外分析报告。分立外周血单个核线或粒本体(PBMCs)，采用多参数流式线或粒本体法术和T线或粒本体依赖性试验分析报告NADPH中所Treg的频带、基因同型和新功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类熟悉研究、比如说和回归)开展无监督聚类分析，分析报告Treg基因同型。

结果：与肥胖症NADPH相较，来自迟成果本体的潜意识CD4+T线或粒本体的监督聚类推断，激活的潜意识CD4+ Treg频带增高，与糖皮质激素可借的TNFR方面蛋白(GITR)传达增高有关。一名HbA1c下降时的病征与成果较迟者和匹配的结果表明成员相较，Treg谱并不相同。新功能分析得造出论点，与肥胖症NADPH相较，来自较迟成果本体的Treg内皮细胞的CD4+物理现象T线或粒本体依赖性明显受损。展现造出为对物理现象CD4+T线或粒本体CD25和CD134传达的依赖性增高。

上图1 熟悉的基因同型分析推断，CD4+Treg亚同型在迟成果数据流中所增高。由FlowSOM作用于的Treg房，组织起来在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -线或粒本体上。根据标明物传达熟悉研究造出10个元簇:潜意识T线或粒本体_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T线或粒本体;HLA-DR + GITR +潜意识T线或粒本体;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用到9个并不相同Treg标明作用于的10个元簇的MST。每个路由器代表一个集群(100个集群)，相当大的元集群(10个元集群)在路由器组成员周围制做。每个路由器中所的面包上图暗示单个标明的传达级别。(b)每个元聚类的热上图，以推断整本体标明传达。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)作用于上图，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的基岩。(e-l)相较较重元素为每个metacluster箱线或上图(重元素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T线或粒本体(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T线或粒本体(l)。蓝色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩核对和。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 用到CITRUS的预测模同型推测，Treg频带的增高是成果较迟的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参加者和匹配的HD参加者在CD4+CD45RA−T线或粒本体上的差异。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的传奇色彩上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR传达开展分立，建模FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组成员以及NADPHSP 606(蓝色)中所CD25+ cd127的频带核心内容上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱线或上图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达风力着色，箭头突造出的簇被鉴别为SP和HD数据流之间的并不相同。(j)箱线或上图推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员中所，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相较较重元素(倍数)。(k)直方上图推断每个簇的基因同型(黄色)和Treg标明相较较传达与背景传达(金色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。背景与所有其他簇中所标明的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩核对和

上图3 与肥胖症献血者相较，成果较迟者潜意识treg的GITR增高。每个潜意识CD4+T线或粒本体元簇(潜意识T线或粒本体_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T线或粒本体;HLA-DR + GITR +潜意识T线或粒本体;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个传达标明的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的传达热上图(sp606不仅限于在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR传达串联，推断直方上图(c)和核心内容上图(d)。Wilcoxon配对大写秩和核对和，p< 0.07(蓝色)所有NADPH仅限于，p< 0.05(金色)NADPHSP 606和匹配的HD不仅限于在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR传达，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(蓝色)串联，推断直方上图(e)和核心内容上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写秩核对和

上图4 来自较迟成果的CD4+ treg线或粒本体控制物理现象CD4+T线或粒本体的并能降低。SP组成员用金色的线或和边框暗示，HD组成员用黄色的线或和边框暗示，蓝色的线或/边框暗示NADPHsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒本体开展分选。CD4+CD25−(应将答者)被标明为CFSE, Treg按判读的倍数硫酸铜。用抗CD3 /28微珠激活线或粒本体，人才培养3几天后开展流式线或粒本体法术测定。(a-d)与CD4+应将答者相较较应将的treg人才培养(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应将答者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性倍数。用到HIV对照(激活的响应将线或粒本体另有treg)计算依赖性倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 物理现象CD4+T线或粒本体对较迟成果的T线或粒本体激活的依赖性更敏感。SP组成员用金色的线或和边框暗示，HD组成员用黄色的线或和边框暗示，蓝色的线或/边框暗示NADPHsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒本体开展分选。CD4+CD25−(应将答者)被cfsel标明，treg按判读的倍数硫酸铜。用抗CD3 /28微珠激活线或粒本体，人才培养3几天后开展流式线或粒本体法术(CD25反染)和线或粒本体因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606应将答者合作人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性花红(b)。(c,d) CD25依赖性花红(c)和CD134依赖性花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中所的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得造出的论点是，来自较迟成果子的激活潜意识CD4+Treg在GITR传达中所获取了扩展和丰富，强调了进一步熟悉研究Treg在1同型肾病几率个本体中所的异质性的必要性。

原文造出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28