Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里逐渐扩展

从第一次再次显露现家兔自身抗纤到再次显露现1同型哮喘诊断病征的实质性率在学童一时期就有较好的叙述，多个家兔自身抗纤白血病的学童里面有70%在胰岛素类比后10周内患上哮喘，而随访15年的学童这一比例上升到84%。比起来说之下，占诊断1同型哮喘一半以上的同型1同型哮喘的发病机制还不会得到充分的研究成果。

越来越多的人开始应用于已确定系统来定义1同型哮喘的实质性：个纤在再次显露现多种家兔自身抗纤时带入第1阶段，再次显露现血糖出现异常时带入第2阶段，再次显露现病征时带入第3阶段。一些多发家兔自身抗纤白血病的个纤，在1期和2期，实质性速度迟，并发展为发病的1同型哮喘。我们之前叙述了一第三组在首次样品到多种家兔自身抗纤样本后非常少10年无哮喘的极迟实质性者，这第三组病变人数少，但特征非常明确。随后，我们发现家兔自身复合物特异性CD8+T复合物自由基在实质性加速的病变里面基本不共存，但在近期发病和长期共存的哮喘病变里面很容易样品到。这确实计算显露来结论，与实质性病变比起来说，这些病变致病自由基的调节加强。

早期研究成果计算显露来结论，尽管调节性T复合物(Treg)使用量正常，但哮喘病变共存一些动态缺陷，其里面仅限于对IL-2的自由基灵活性降低。此外，哮喘病变里面的物理现象CD4+T复合物确实对调节更具抵抗性，乏善可陈为物理现象T复合物的依赖性逼近，连续性产生的Treg和纤外产生的诱导Treg，以及复合物经历的CD4+T复合物里面IL-2自由基逼近。本研究成果的目的是叙述了CD4+调节性T复合物(Treg)在一小群极加速实质性者里面的特征，他们的平均年龄组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方式：BOX研究成果是一项以年轻人为基础的横向研究成果，在21岁请注意确诊的病变亲属里面反应器对1同型哮喘的生命危险因素。我们之前叙述了长期加速实质性者的特征，他们保证多重家兔自身抗纤白血病超过10年，但不会再次显露现哮喘的诊断病征，迟性或非进行时性致病。随后，10名继续保证无哮喘并想要共享大量血液循环样本的加速实质性者纳入T和B复合物动态统计分析。在目前的研究成果里面，8名迟实质性者(SP第三组)，里面位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的家兔自身抗纤白血病。所有的与会者都正处于1同型哮喘实质性的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身抗纤对某些复合物的白血病自由基，然而，一名病变早已正处于2期非常少6年，但不会再次显露现诊断病征，一名病变被诊断为哮喘，该受试者72岁，在通过观察试验车样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在研究小组里面对该供纤进行时了单独风险评估。分开外周血单个反应器复合物(PBMCs)，采用多实例流式复合物奥义和T复合物依赖性试验车风险评估供纤里面Treg的频率、变异和动态。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、总括和回归)进行时无行政官员聚类统计分析，风险评估Treg变异。

结果：与健康供纤比起来说，来自迟实质性纤的潜意识CD4+T复合物的行政官员聚类标示出，激来时的潜意识CD4+ Treg频率上升，与糖皮质激素诱导的TNFR之外复合物(GITR)强调上升有关。一名HbA1c升高的病变与实质性加速者和冗余的对照第三组比起来说，Treg谱不尽相同。动态统计分析计算显露来结论，与健康供纤比起来说，来自加速实质性纤的Treg细胞内的CD4+物理现象T复合物依赖性明显破损。乏善可陈为对物理现象CD4+T复合物CD25和CD134强调的依赖性上升。

示意图1 深入的变异统计分析标示出，CD4+Treg亚同型在迟实质性路由表里面上升。由FlowSOM聚合的Treg室，聚集在来自所有供纤的来时CD4+CD45RA -复合物上。根据标记物强调鉴定显露10个元簇:潜意识T复合物_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T复合物;HLA-DR + GITR +潜意识T复合物;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)应用于9个不同Treg标记聚合的10个元簇的MST。每个结点代表一个空降兵(100个空降兵)，极大的元空降兵(10个元空降兵)在结点第三组周围上色。每个结点里面的饼示意图坚称单个标记的强调级别。(b)每个元聚类的热示意图，以标示出整纤标记强调。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)聚合示意图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起原子量为每个metacluster装有中央线示意图(原子量> 0.05%)已确定为HD和SP第三组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T复合物(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T复合物(l)。深蓝色红色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 应用于CITRUS的实测证实，Treg频率的上升是实质性加速的标识。分级门控(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP与会者和冗余的HD与会者在CD4+CD45RA−T复合物上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调进行时分开，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第三组以及供纤SP 606(深蓝色)里面CD25+ cd127的频率概要示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的装有中央线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度渐变，箭头突显露的簇被辨认为SP和HD路由表错综复杂的不同。(j)装有中央线示意图标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组里面，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的比起原子量(比例)。(k)概率分布标示出每个簇的变异(粉色)和Treg标记比起强调与或多或少强调(白色);上列，磁盘Treg_3;前面一路上，磁盘Treg_4。或多或少与所有其他簇里面标记的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验

示意图3 与健康献血者比起来说，实质性加速者潜意识treg的GITR上升。每个潜意识CD4+T复合物元簇(潜意识T复合物_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T复合物;HLA-DR + GITR +潜意识T复合物;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个强调标记的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的强调热示意图(sp606不仅限于在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇里面所有HD(黄褐色)、所有SP(白色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR强调串接，标示出概率分布(c)和概要示意图(d)。Wilcoxon筛选符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有供纤仅限于，p< 0.05(白色)供纤SP 606和冗余的HD不仅限于在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR强调，从分级门控，从所有HD(黄褐色)、所有SP(白色)和SP 606(深蓝色)串接，标示出概率分布(e)和概要示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩检验

示意图4 来自加速实质性的CD4+ treg复合物控制物理现象CD4+T复合物的灵活性降低。SP第三组用白色的中央线和红色坚称，HD第三组用银色的中央线和红色坚称，深蓝色的中央线/红色坚称供纤sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T复合物进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被标记为CFSE, Treg按观察的比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠来时化复合物，培养3天后进行时流式复合物奥义样品。(a-d)与CD4+转发者比起应的treg培养(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培养。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE依赖性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百分比。应用于白血病对照(激来时的响应复合物不含treg)计算依赖性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 物理现象CD4+T复合物对加速实质性的T复合物来时化的依赖性更适合于。SP第三组用白色的中央线和红色坚称，HD第三组用银色的中央线和红色坚称，深蓝色的中央线/红色坚称供纤sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T复合物进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标记，treg按观察的比例硫酸铜。用抗CD3 /28微珠来时化复合物，培养3天后进行时流式复合物奥义(CD25反染)和复合物因叔父统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者携手培养。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE依赖性百分率(b)。(c,d) CD25依赖性百分率(c)和CD134依赖性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在五小里面的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们计算显露来的结论是，来自加速实质性叔父的来时化潜意识CD4+Treg在GITR强调里面得到了扩张和丰富，强调了全面性研究成果Treg在1同型哮喘几率个纤里面的异质性的必要性。

原文显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28